重组烟草蚀纹病毒蛋白酶
- 别名：rTEV Protease
- 编码：DAA1072A
- 级别：
- 简介：重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/
基础信息
| 中文名 | 重组烟草蚀纹病毒蛋白酶 |
| 英文名 | rTEV Protease |
| 品牌 | Seebio |
产品介绍
重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
反应时间（h） | 不同温度下剪切活性（%） | |||
4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
1 | 34 | 58 | 56 | 70 |
2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
产品性质
来源（Source） | 大肠杆菌 |
外观(Appearance） | 无色透明液体 |
比活力（Specific Activity） | 5 U/μL |
活性定义（Unit Definition） | 在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反应1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。 |
纯化（Purification） | Ni柱亲和纯化 |
纯度（Purity） | ≥95%（by SDS-PAGE） |
产品组分
组分名称 | 产品货号/规格 | |||
DAA1072A-1Ku | DAA1072A-10×1Ku | DAA1072A-10Ku | DAA1072A-50Ku | |
rTEV Protease（5 U/μL） | 200 μL | 10×200 μL | 2×1 mL | 10 mL |
rTEV Buffer （10×） | 600 μL | 10×600 μL | 6 mL | 30 mL |
运输与保存方法
冰袋运输。
rTEV Buffer于-20℃保存，一年稳定。rTEV Protease，-20℃保存，6个月稳定；-80℃长期保存，一年稳定。建议收到货或者第一次使用时分装各组分保存，避免反复冻融。
应用实例
1. 在EP管中配制如下反应体系。
组分 | 用量 |
融合蛋白 | 40 μg |
rTEV Protease (5 U/μL) | 4 μL |
rTEV buffer（10×） | 15 μL |
DDW（超纯水） | up to 150 μL |
2. 30℃孵育，在1、2、4、6小时分别吸出30 μL上述反应液，置于单独的EP管中。
3. 向上述EP管中加入30 μL 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
4. 样品全部反应完毕后，样品煮沸5 min，取40 μL进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。如融合蛋白要求低温处理，可将反应液置于4℃，延长反应时间，并增加rTEV酶用量，以保证酶切效果。
注意事项
1. 影响天然TEV酶活性的常见因素：
1）PMSF和AEBSF（1mM），TLCK（1mM），Bestatin（1mg/mL），EDTA（1mM），Pestatin A（1mM）以及E-64（3mg/mL），而rTEV可兼容上述抑制剂；
2）Zn离子浓度（>5mM），同样对rTEV活性有抑制；
3）与半胱氨酸反应的试剂，也是rTEV的潜在抑制剂。
1）PMSF和AEBSF（1mM），TLCK（1mM），Bestatin（1mg/mL），EDTA（1mM），Pestatin A（1mM）以及E-64（3mg/mL），而rTEV可兼容上述抑制剂；
2）Zn离子浓度（>5mM），同样对rTEV活性有抑制；
3）与半胱氨酸反应的试剂，也是rTEV的潜在抑制剂。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
