重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

  • 别名:rTEV Protease
  • 编码:DAA1072A
  • 级别:
  • 简介:重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/
品牌 货号 包装规格 库存 价格 数量
Seebio DAA1072A-1Ku 1Ku ¥215.00 元
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Seebio DAA1072A-10×1Ku 10×1Ku ¥1,595.00 元
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Seebio DAA1072A-10Ku 10Ku ¥1,355.00 元
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Seebio DAA1072A-50Ku 50Ku ¥5,425.00 元
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基础信息

中文名重组烟草蚀纹病毒蛋白酶
英文名rTEV Protease
品牌Seebio

产品介绍

重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly。rTEV在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性,但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性(见表1),使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
反应时间(h)
不同温度下剪切活性(%)
4℃
16℃
21℃
30℃
1
34
58
56
70
2
58
80
78
90
3
71
99
99
99
3.5
84
99
99
99
产品性质
来源(Source)
大肠杆菌
外观(Appearance)
无色透明液体
比活力(Specific Activity)
5 U/μL
活性定义(Unit Definition)
在1×rTEV Buffer(50 mM Tris,pH 8.0,0.5 mM EDTA,1 mM DTT)中,30℃反应1 h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化(Purification)
Ni柱亲和纯化
纯度(Purity)
95%(by SDS-PAGE)
产品组分
组分名称
产品货号/规格
DAA1072A-1Ku
DAA1072A-10×1Ku
DAA1072A-10Ku
DAA1072A-50Ku
rTEV Protease(5 U/μL)
200 μL
10×200 μL
2×1 mL
10 mL
rTEV Buffer (10×
600 μL
10×600 μL
6 mL
30 mL
运输与保存方法
冰袋运输。
rTEV Buffer于-20℃保存,一年稳定。rTEV Protease,-20℃保存,6个月稳定;-80℃长期保存,一年稳定。建议收到货或者第一次使用时分装各组分保存,避免反复冻融。
应用实例
1. 在EP管中配制如下反应体系。
组分
用量
融合蛋白
40 μg
rTEV Protease (5 U/μL)
4 μL
rTEV buffer(10×
15 μL
DDW(超纯水)
up to 150 μL
2. 30℃孵育,在1、2、4、6小时分别吸出30 μL上述反应液,置于单独的EP管中。
3. 向上述EP管中加入30 μL 2×SDS Loading Buffer,置于-20℃。
4. 样品全部反应完毕后,样品煮沸5 min,取40 μL进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。如融合蛋白要求低温处理,可将反应液置于4℃,延长反应时间,并增加rTEV酶用量,以保证酶切效果。
注意事项
1. 影响天然TEV酶活性的常见因素:
1)PMSF和AEBSF(1mM),TLCK(1mM),Bestatin(1mg/mL),EDTA(1mM),Pestatin A(1mM)以及E-64(3mg/mL),而rTEV可兼容上述抑制剂;
2Zn离子浓度(>5mM),同样对rTEV活性有抑制;
3)与半胱氨酸反应的试剂,也是rTEV的潜在抑制剂。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途!

质量指标

MSDS

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