重组烟草蚀纹病毒蛋白酶
- 别名:rTEV Protease
- 编码:DAA1072A
- 级别:
- 简介:重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/
基础信息
中文名 | 重组烟草蚀纹病毒蛋白酶 |
英文名 | rTEV Protease |
品牌 | Seebio |
产品介绍
重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性,但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性(见表1),使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
反应时间(h) | 不同温度下剪切活性(%) | |||
4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
1 | 34 | 58 | 56 | 70 |
2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
产品性质
来源(Source) | 大肠杆菌 |
外观(Appearance) | 无色透明液体 |
比活力(Specific Activity) | 5 U/μL |
活性定义(Unit Definition) | 在1×rTEV Buffer(50 mM Tris,pH 8.0,0.5 mM EDTA,1 mM DTT)中,30℃反应1 h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。 |
纯化(Purification) | Ni柱亲和纯化 |
纯度(Purity) | ≥95%(by SDS-PAGE) |
产品组分
组分名称 | 产品货号/规格 | |||
DAA1072A-1Ku | DAA1072A-10×1Ku | DAA1072A-10Ku | DAA1072A-50Ku | |
rTEV Protease(5 U/μL) | 200 μL | 10×200 μL | 2×1 mL | 10 mL |
rTEV Buffer (10×) | 600 μL | 10×600 μL | 6 mL | 30 mL |
运输与保存方法
冰袋运输。
rTEV Buffer于-20℃保存,一年稳定。rTEV Protease,-20℃保存,6个月稳定;-80℃长期保存,一年稳定。建议收到货或者第一次使用时分装各组分保存,避免反复冻融。
应用实例
1. 在EP管中配制如下反应体系。
组分 | 用量 |
融合蛋白 | 40 μg |
rTEV Protease (5 U/μL) | 4 μL |
rTEV buffer(10×) | 15 μL |
DDW(超纯水) | up to 150 μL |
2. 30℃孵育,在1、2、4、6小时分别吸出30 μL上述反应液,置于单独的EP管中。
3. 向上述EP管中加入30 μL 2×SDS Loading Buffer,置于-20℃。
4. 样品全部反应完毕后,样品煮沸5 min,取40 μL进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。如融合蛋白要求低温处理,可将反应液置于4℃,延长反应时间,并增加rTEV酶用量,以保证酶切效果。
注意事项
1. 影响天然TEV酶活性的常见因素:
1)PMSF和AEBSF(1mM),TLCK(1mM),Bestatin(1mg/mL),EDTA(1mM),Pestatin A(1mM)以及E-64(3mg/mL),而rTEV可兼容上述抑制剂;
2)Zn离子浓度(>5mM),同样对rTEV活性有抑制;
3)与半胱氨酸反应的试剂,也是rTEV的潜在抑制剂。
1)PMSF和AEBSF(1mM),TLCK(1mM),Bestatin(1mg/mL),EDTA(1mM),Pestatin A(1mM)以及E-64(3mg/mL),而rTEV可兼容上述抑制剂;
2)Zn离子浓度(>5mM),同样对rTEV活性有抑制;
3)与半胱氨酸反应的试剂,也是rTEV的潜在抑制剂。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途!