牛痘病毒加帽体系

  • 别名:Vaccinia Capping System
  • 编码:EAE0033A
  • 级别:
  • 简介:牛痘病毒加帽体系利用牛痘病毒加帽酶及相关组分,将 7-甲基鸟苷帽结构(m7Gppp,Cap0)加到 RNA 的 5´ 末端。在真核生物中,该结构与 mRNA 的稳定、转运和翻译密切相关。
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基础信息

中文名称牛痘病毒加帽体系品牌

产品介绍

产品描述:
牛痘病毒加帽体系利用牛痘病毒加帽酶及相关组分,将 7-甲基鸟苷帽结构(m7Gppp,Cap0)加到RNA的5´末端。在真核生物中,该结构与mRNA的稳定、转运和翻译密切相关。使用酶促反应为RNA加帽是一种简单有用的方法,且帽结构与自然Cap 0结构一致,能显著改善用于体外转录、转染和显微注射的RNA的稳定性和翻译能力。这种酶由两个亚基(D1 和D12)组成,D1亚基执行RNA三磷酸酶和鸟苷转移酶的功能,D12亚基执行鸟嘌呤甲基转移酶的功能,它们对于添加一个完整的Cap 0结构m7Gppp5´N都是必须的。 
本体系可用于IVT RNA的加帽反应,使加帽反应在1h之内完成,效率接近完整,并且保证正确的方向。IVT推荐使用蛋白质T7 High Yield RNA Transcription kit。
产品用途:
体内或体外翻译前 mRNA的加帽和mRNA的5’末端标记。
注意事项:
SAM:需事先计算好SAM的用量,在反应开始前把分装的32mM的储备液稀释成2mM的工作液。SAM在pH7-8,37°C条件下不稳定,需要在反应开始之前新鲜配置。为避免SAM降解,该工作液需要保存于冰上。 
RNA:在加帽体系使用之前,应将体外转录反应产生的RNA进行纯化并溶解于RNase-free水中,不能将RNA溶解在EDTA溶液或其他盐溶液中。 
RNA 二级结构:一些RNA转录本可能形成稳定的二级结构(同源二聚体和发卡结构),如二级结构发生在转录本的5'端会影响加帽效率。在与加帽酶反应之前加热RNA可以去除转录产物5´端的二级结构,如果转录产物的5´端结构复杂,可以把加热时间延长到10min,加帽反应时间可延长到60min。 
Cap 0-和Cap 1-mRNA:Cap 0-和Cap 1-mRNA之间的差异在RNA 5'端紧邻帽结构的一位核苷酸(N1)是否具有 2'-O-甲基。在高等真核细胞中,该甲基化是自然加帽过程的一部分,Cap 1结构提高了mRNA的翻译效率。 
Vaccinia Capping System可以与mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase在一个体系内同时工作产生Cap 1结构。当使用新的细胞系或翻译系统时,建议比较Cap 0-和Cap 1-mRNA翻译效率和免疫原性,以确定合适的帽子结构。 
Poly(A) 尾:如果加帽的RNA需要添加3'-poly(A)尾巴,可以使用蛋白质E.coli. Poly(A) Polymerase进行加尾。加帽和加尾后的RNA需在进行RNA转染实验前做纯化处理。 
RNase Inhibitor:在配置反应体系时,可以加入0.5µl蛋白质RNase inhibitor,同时去掉等体积的RNase-free水。 
RNA5’端标记:在用于RNA 5´端标记时,GTP 储备液应稀释到mRNA 浓度的 1-3 倍。 


质量指标

MSDS

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