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D-二聚体(D-Dimer)-磁微粒化学法学发光(AP/AE) /荧光免疫层析解决方案

发布时间:2024-04-07 点击数:164
D-Dimer检测
1.项目背景
1.1  D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子ⅩⅢ交联后,经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物,能够反映体内的凝血功能和纤溶活性,是机体高凝状态、血栓形成、继发性纤溶亢进的指标。在深静脉血栓、肺栓塞、弥散性血管内凝血、重症肝炎等疾病中水平升高,以及溶栓治疗后均可见D-二聚体水平升高,可作为溶栓治疗的有效观察指标。由于具有极高的敏感性和阴性预测值,临床上已经将D-二聚体阴性作为排除肺栓塞(pulmonary embolism,PE)、深静脉血栓(deep venous thrombosis,DVT)形成的重要依据。
1.2  目前D-二聚体检测方法众多,主要有酶联免疫吸附(ELISA)、酶联免疫荧光(ELFA)、非增强胶乳凝集试验、胶乳增强免疫比浊法、化学发光法、免疫层析(POCT)等。这些方法在检测方便性、检测时长、检测敏感性、结果报告(定性/半定量/定量)等方面各有不同。由于针对 D-二聚体D-结构域单克隆抗体的引入,使得检测特异性和敏感性获得了显著的提高,但不同检测方法间结果差异可达几十倍,特别是检测敏感性(阴性排除价值),大多数未获得验证或权威机构认可。
1.3  在2022年《急诊胸痛心血管标志物联合检测专家共识》中,推荐意见 12 :基于D-二聚体检测缺乏国际认证的内部对照或校准品,不同实验室结果不具可比性,建议在动态监测时采用同一方法。【推荐级别:强推荐】
2.性能表现
针对D-二聚体的检测,西宝生物推出2种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下。
2.1化学发光(AP)平台:
2.1.1组合1:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记碱性磷酸酶;
线性范围:0.05mg/L-40mg/L;最低检出限:0.05mg/L;
浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.1.2组合2:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)标记碱性磷酸酶;
线性范围:0.05mg/L-40mg/L;最低检出限:0.05mg/L;
浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.2化学发光(AE)平台:
2.2.1组合3:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记吖啶酯;
线性范围:0.05mg/L-40mg/L;最低检出限:0.05mg/L;
浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.2.2组合4:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)标记吖啶酯;
线性范围:0.05mg/L-40mg/L;最低检出限:0.05mg/L;
浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.3荧光免疫层析(镧系元素Eu螯合物填充)平台:
组合5:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记荧光微球+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)划膜;
线性范围:0.1mg/L-15mg/L。
浓度值在660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
3. 临床相关性
3.1 化学发光(AP)平台:
3.1.1 组合1
西宝DD抗体配对组合1(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;
西宝DD抗体配对组合1(<40mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95。
3.1.2 组合2
西宝DD抗体配对组合2(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.94左右;
西宝DD抗体配对组合2(<40mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2大于0.95。
3.2化学发光(AE)平台:
3.2.1 组合3
西宝DD抗体配对组合3(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95;
西宝DD抗体配对组合3(<40mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95。
3.2.2 组合4
西宝DD抗体配对组合4(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;
西宝DD抗体配对组合4(<40mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95。
3.3荧光免疫层析(镧系元素Eu螯合物填充)平台:
西宝DD抗体配对组合5(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;
西宝DD抗体配对组合5(<15mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95。
4. 测试方案
4.1化学发光(AP)平台:
4.1.1 组合1
待测抗原: D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品(需要预稀释):加样量20ul;
试剂1:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记-碱性磷酸酶稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步: 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步: 加入底物,进行测试。
4.1.2 组合2
待测抗原: D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品(需要预稀释):加样量20ul;
试剂1: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)标记-碱性磷酸酶稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步: 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步: 加入底物,进行测试。
测试使用发光仪器: 迎凯Shine i2900。
4.2化学发光(AE)平台:
4.2.1 组合3
待测抗原: D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品(需要预稀释):加样量20ul;
试剂1: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步: 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步: 加入预激发液及激发液,进行测试。
4.2.2 组合4
待测抗原: D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品(需要预稀释):加样量20ul;
试剂1: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步: 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步: 加入预激发液及激发液,进行测试。
测试使用发光仪器: 科斯迈SMART 500S。
4.3荧光免疫层析(镧系元素Eu螯合物填充)平台 组合5:
待测抗原:D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品:加样量5ul;
反应条件: 样本+荧光液混匀,上样,反应时间(10min-15min);
测试使用荧光仪器: 和迈FIC-S100;
5.产品信息
产品名称
货号
推荐配对
D-二聚体(D-Dimer)抗体
EKY0088M
D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠+D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)标记碱性磷酸酶 (发光配对组合1)
D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠+D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)标记碱性磷酸酶 (发光配对组合2)
D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠+D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)标记吖啶酯 (发光配对组合3)
D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠+D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)标记吖啶酯 (发光配对组合4)
D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)标记荧光微球+D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)划膜 (荧光配对组合)
D-二聚体(D-Dimer)抗体
EKY0088N
D-二聚体(D-Dimer)抗原(天然)
EKN0230D
校准、质控
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088M)-羧基磁珠浓缩液
DKY1330A
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088N)-羧基磁珠浓缩液
DKY1330B
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088M)-碱性磷酸酶浓缩液
DKY1330C
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088N)-碱性磷酸酶浓缩液
DKY1330D
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088M)-吖啶酯浓缩液
DKY1330E
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088N)-吖啶酯浓缩液
DKY1330F
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088N)标记荧光微球浓缩液
DKY1330G
 
AMPPD 发光底物液(即用型)
DCD0517A
 
AMPPD 发光底物液(即用型)
DCD0517B-
 
羧基磁性微球,1.5um
DEG0800C
 
时间分辨荧光微球,羧基(200nm)
AEG0786B
 
部分图片来源于网络

 

D-Dimer检测
1.项目背景
1.1  D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子ⅩⅢ交联后,经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物,能够反映体内的凝血功能和纤溶活性,是机体高凝状态、血栓形成、继发性纤溶亢进的指标。在深静脉血栓、肺栓塞、弥散性血管内凝血、重症肝炎等疾病中水平升高,以及溶栓治疗后均可见D-二聚体水平升高,可作为溶栓治疗的有效观察指标。由于具有极高的敏感性和阴性预测值,临床上已经将D-二聚体阴性作为排除肺栓塞(pulmonary embolism,PE)、深静脉血栓(deep venous thrombosis,DVT)形成的重要依据。
1.2  目前D-二聚体检测方法众多,主要有酶联免疫吸附(ELISA)、酶联免疫荧光(ELFA)、非增强胶乳凝集试验、胶乳增强免疫比浊法、化学发光法、免疫层析(POCT)等。这些方法在检测方便性、检测时长、检测敏感性、结果报告(定性/半定量/定量)等方面各有不同。由于针对 D-二聚体D-结构域单克隆抗体的引入,使得检测特异性和敏感性获得了显著的提高,但不同检测方法间结果差异可达几十倍,特别是检测敏感性(阴性排除价值),大多数未获得验证或权威机构认可。
1.3  在2022年《急诊胸痛心血管标志物联合检测专家共识》中,推荐意见 12 :基于D-二聚体检测缺乏国际认证的内部对照或校准品,不同实验室结果不具可比性,建议在动态监测时采用同一方法。【推荐级别:强推荐】
2.性能表现
针对D-二聚体的检测,西宝生物推出2种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下。
2.1化学发光(AP)平台:
2.1.1组合1:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记碱性磷酸酶;
线性范围:0.05mg/L-40mg/L;最低检出限:0.05mg/L;
浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.1.2组合2:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)标记碱性磷酸酶;
线性范围:0.05mg/L-40mg/L;最低检出限:0.05mg/L;
浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.2化学发光(AE)平台:
2.2.1组合3:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记吖啶酯;
线性范围:0.05mg/L-40mg/L;最低检出限:0.05mg/L;
浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.2.2组合4:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)标记吖啶酯;
线性范围:0.05mg/L-40mg/L;最低检出限:0.05mg/L;
浓度值在1660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
2.3荧光免疫层析(镧系元素Eu螯合物填充)平台:
组合5:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记荧光微球+D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)划膜;
线性范围:0.1mg/L-15mg/L。
浓度值在660 mg/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
3. 临床相关性
3.1 化学发光(AP)平台:
3.1.1 组合1
西宝DD抗体配对组合1(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;
西宝DD抗体配对组合1(<40mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95。
3.1.2 组合2
西宝DD抗体配对组合2(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.94左右;
西宝DD抗体配对组合2(<40mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2大于0.95。
3.2化学发光(AE)平台:
3.2.1 组合3
西宝DD抗体配对组合3(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95;
西宝DD抗体配对组合3(<40mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95。
3.2.2 组合4
西宝DD抗体配对组合4(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;
西宝DD抗体配对组合4(<40mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95。
3.3荧光免疫层析(镧系元素Eu螯合物填充)平台:
西宝DD抗体配对组合5(<4mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2在0.95左右;
西宝DD抗体配对组合5(<15mg/L)的发光值与希森美康DD试剂临床相关性R2>0.95。
4. 测试方案
4.1化学发光(AP)平台:
4.1.1 组合1
待测抗原: D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品(需要预稀释):加样量20ul;
试剂1:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记-碱性磷酸酶稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步: 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步: 加入底物,进行测试。
4.1.2 组合2
待测抗原: D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品(需要预稀释):加样量20ul;
试剂1: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)标记-碱性磷酸酶稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步: 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步: 加入底物,进行测试。
测试使用发光仪器: 迎凯Shine i2900。
4.2化学发光(AE)平台:
4.2.1 组合3
待测抗原: D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品(需要预稀释):加样量20ul;
试剂1: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步: 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步: 加入预激发液及激发液,进行测试。
4.2.2 组合4
待测抗原: D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品(需要预稀释):加样量20ul;
试剂1: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2: D-二聚体(D-Dimer)单克隆抗体(货号:EKY0088M)标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步: 20ul预稀释样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步: 加入预激发液及激发液,进行测试。
测试使用发光仪器: 科斯迈SMART 500S。
4.3荧光免疫层析(镧系元素Eu螯合物填充)平台 组合5:
待测抗原:D-二聚体(D-Dimer)抗原(货号:EKN0230D),样本/标准品:加样量5ul;
反应条件: 样本+荧光液混匀,上样,反应时间(10min-15min);
测试使用荧光仪器: 和迈FIC-S100;
5.产品信息
产品名称
货号
推荐配对
D-二聚体(D-Dimer)抗体
EKY0088M
D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠+D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)标记碱性磷酸酶 (发光配对组合1)
D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠+D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)标记碱性磷酸酶 (发光配对组合2)
D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)包被羧基磁珠+D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)标记吖啶酯 (发光配对组合3)
D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)包被羧基磁珠+D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)标记吖啶酯 (发光配对组合4)
D-二聚体抗体(货号:EKY0088N)标记荧光微球+D-二聚体抗体(货号:EKY0088M)划膜 (荧光配对组合)
D-二聚体(D-Dimer)抗体
EKY0088N
D-二聚体(D-Dimer)抗原(天然)
EKN0230D
校准、质控
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088M)-羧基磁珠浓缩液
DKY1330A
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088N)-羧基磁珠浓缩液
DKY1330B
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088M)-碱性磷酸酶浓缩液
DKY1330C
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088N)-碱性磷酸酶浓缩液
DKY1330D
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088M)-吖啶酯浓缩液
DKY1330E
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088N)-吖啶酯浓缩液
DKY1330F
 
D-二聚体(D-Dimer)抗体(货号:EKY0088N)标记荧光微球浓缩液
DKY1330G
 
AMPPD 发光底物液(即用型)
DCD0517A
 
AMPPD 发光底物液(即用型)
DCD0517B-
 
羧基磁性微球,1.5um
DEG0800C
 
时间分辨荧光微球,羧基(200nm)
AEG0786B
 
部分图片来源于网络

 

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