1.项目背景
组织型纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活抑制物-1复合物 (tissue plasminogen activator-plasminogen activator inhibitor-1 complex，tPAI.C):tPAI.C是血管内皮细胞损伤时，释放t-PA与PAI-1共同入血形成的复合物。tPAI.C的正常值根据性别有不同，男性血浆正常值<17.0 ng/mL，女性<10.5 ng/mL。理论上tPAI.C是内皮损伤及纤溶系统激活的产物，临床研究中发现tPAI.C对休克严重状态特别是脓毒症休克的诊断价值很高。
血液中t-PA・PAI-1抗原量反映了释放于血液中的t-PA的量，因此针对t-PA增加的病态，就结果而言其t-PA・PAI-1复合物也会增加释放于血液中的t-PA会将纤溶酶原激活为纤溶酶，因此可将t-PA・PAI-1复合物作为纤溶系统的分子标志物，PIC的增加代表着纤溶系统最终阶段的纤溶酶的生成，相对于此，t-PA・PAI-1复合物的增加并不一定意味着纤溶亢进。
血管内皮细胞受损后，t-PA会与PAI-1一同释放于血液中，因此可认为t-PA・PAI-1复合物的上升也反映了血管受损。动静脉血栓的存在、炎性细胞因子和内毒素带来的刺激，会引发大范围血管病变的代谢性疾病等现象均易引起t-PA・PAI-1复合物上升。有报告指出，在并发有多器官功能衰竭的弥散性血管内凝血中，病程中血中t-PA・PAI-1复合物呈高值的病例绝大多数预后不佳。下图是tPAI.C的作用机制。
2. 性能表现
针对tPAI.C的检测，西宝生物推出5种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）
2.1化学发光（AE）平台
组合1：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204A）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205A）标记吖啶酯；
线性范围：1 ng/mL-100 ng/mL；最低检出限：1 ng/mL。
组合2：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204A）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204B）标记吖啶酯；
线性范围：1 ng/mL-100 ng/mL；最低检出限：1 ng/mL。
2.2化学发光（AP）平台
组合3：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204C）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205C）标记碱性磷酸酶；
线性范围：1 ng/mL-100 ng/mL；最低检出限：1 ng/mL。
2.3稳定性评估
2.3.1 tPAI.C抗原稳定性
采用磁珠标记物稀释液（货号：DCD0532A）将tPAI.C抗原（货号：EDD0796B）稀释成5个梯度（液体型），进行37℃热稳定性实验。如表1所示，tPAI.C抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明tPAI.C抗原稀释梯度（液体型）热稳定性良好。
表1 tPAI.C抗原稀释梯度（液体型）热稳定性7天数据
序号 | tPAI.C 抗原稀释浓度浓度ng/mL | tPAI.C 抗原稀释梯度（液体型）2℃-8℃储存7天发光值均值 | tPAI.C 抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天发光值均值 | tPAI.C 抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | 17053 | 17591 | 3.2% |
S1 | 1 | 157554 | 149224 | -5.3% |
S2 | 5 | 640325 | 625343 | -2.3% |
S3 | 12.5 | 1536860 | 1473164 | -4.1% |
S4 | 50 | 6238834 | 5723227 | -8.3% |
S5 | 100 | 11871700 | 11114161 | -6.4% |
平均变化（不含S0） | -5.3% | |||
2.3.2 AP体系试剂稳定性
采用磁珠标记物稀释液（货号：DCD0532A）将Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204C）包被羧基磁珠浓缩液稀释成工作液，进行37℃热稳定性实验；采用碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（货号：DCD0533A）将Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205C）标记碱性磷酸酶浓缩液稀释成工作液，进行37℃热稳定性实验。如表2所示：
a.tPAI.C磁珠工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化为-1.6%，在±10%以内（不含S0），表明tPAI.C磁珠工作液热稳定性良好；
b.tPAI.C碱性磷酸酶工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化为-9.1%，在±10%左右（不含S0），表明tPAI.C碱性磷酸酶工作液热稳定性较好。
c.tPAI.C全试剂工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化为-13.6%，在±15%左右（不含S0），表明tPAI.C试剂热稳定性较好。
表2 tPAI.C试剂热稳定性7天数据
序号 | tPAI.C 抗原稀释梯度浓度（ng/mL） | 磁珠工作液37℃热加速7天偏差 | 碱磷酶工作液37℃热加速7天偏差 | 全试剂工作液37℃热加速7天偏差 |
S0 | 0 | -8.2% | -5.9% | -9.4% |
S1 | 1 | -4.4% | -9.7% | -13.1% |
S2 | 5 | -2.5% | -10.9% | -13.4% |
S3 | 12.5 | -0.5% | -8.5% | -14.1% |
S4 | 50 | -0.4% | -9.1% | -14.2% |
S5 | 100 | -0.2% | -7.4% | -13.3% |
平均变化（不含S0） | -1.6% | -9.1% | -13.6% | |
3.临床相关性
3.1化学发光（AE）平台
西宝tPAI.C抗体配对组合1（＜20 ng/mL）的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²>0.92。
西宝tPAI.C抗体配对组合1（＜100 ng/mL）的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²在0.95左右。
西宝tPAI.C抗体配对组合2（＜20 ng/mL）的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²>0.92。
西宝tPAI.C抗体配对组合2（＜100 ng/mL）的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²在0.95左右。
3.2化学发光（AP）平台
西宝tPAI.C抗体配对组合3的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²在0.95左右。
4. 测试方案
4.1化学发光（AE）平台抗体配对组合1
待测抗原：tPAI.C抗原（货号：EDD0796B）
样本/校准品:加样量10ul；
试剂1：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204A）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205A）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：10ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.2化学发光（AE）平台抗体配对组合2
样本/校准品:加样量50ul；
试剂1：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204A）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：50ul样本 + 50ul试剂1 + 50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.3化学发光（AP）平台抗体配对组合3
待测抗原：tPAI.C抗原（货号：EDD0796B）
样本/校准品:加样量5ul；
试剂1：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204C）包被-磁珠稀释物，用量100ul/测试；
试剂2：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205C）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量100ul/测试；
反应条件：
第一步：5ul样品 + 100ul试剂1，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入100ul试剂2，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，进行测试。
测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。
5.产品信息
产品名称 | 货号 | 推荐配对 |
纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体 | EKY1205A | 组织型纤溶酶原激活物（t-PA）抗体（货号：EKY1204A）包被羧基磁珠+纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体（货号：EKY1205A）标记吖啶酯 （发光两试剂配对组合1） 组织型纤溶酶原激活物（t-PA）抗体（货号：EKY1204A）包被羧基磁珠+纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体（货号：EKY1204B）标记吖啶酯 （发光两试剂配对组合2） |
组织型纤溶酶原激活物（t-PA）抗体 | EKY1204A | |
纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体 | EKY1204B | |
抗纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗体 | EKY1204C | 纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗体（货号：EKY1204C）包被羧基磁珠+纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗体（货号：EKY1204D）标记碱性磷酸酶 （发光两试剂配对组合3） |
抗纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗体 | EKY1205C | |
组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗原 | EDD0796B | |
组织型纤溶酶原激活物（t-PA）抗体（货号：EKY1204A）-羧基磁珠浓缩液 | DKY1328A | |
纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体（货号：EKY1205A）-吖啶酯浓缩液 | DKY1328B | |
纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体（货号：EKY1204B）-吖啶酯浓缩液 | DKY1328C | |
组织型纤溶酶原激活物抗体（货号：）-羧基磁珠浓缩液 | DKY1328D | |
组织型纤溶酶原激活物抗体（货号：）-碱性磷酸酶浓缩液 | DKY1328E | |
羧基磁性微球，1.2μm | DEG0800D | |
AMPPD 发光底物液（即用型） | DCD0517B | |
重组碱性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠标记物稀释液（化学发光） | DCD0532A | |
碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（化学发光） | DCD0533A |
1.项目背景
组织型纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活抑制物-1复合物 (tissue plasminogen activator-plasminogen activator inhibitor-1 complex，tPAI.C):tPAI.C是血管内皮细胞损伤时，释放t-PA与PAI-1共同入血形成的复合物。tPAI.C的正常值根据性别有不同，男性血浆正常值<17.0 ng/mL，女性<10.5 ng/mL。理论上tPAI.C是内皮损伤及纤溶系统激活的产物，临床研究中发现tPAI.C对休克严重状态特别是脓毒症休克的诊断价值很高。
血液中t-PA・PAI-1抗原量反映了释放于血液中的t-PA的量，因此针对t-PA增加的病态，就结果而言其t-PA・PAI-1复合物也会增加释放于血液中的t-PA会将纤溶酶原激活为纤溶酶，因此可将t-PA・PAI-1复合物作为纤溶系统的分子标志物，PIC的增加代表着纤溶系统最终阶段的纤溶酶的生成，相对于此，t-PA・PAI-1复合物的增加并不一定意味着纤溶亢进。
血管内皮细胞受损后，t-PA会与PAI-1一同释放于血液中，因此可认为t-PA・PAI-1复合物的上升也反映了血管受损。动静脉血栓的存在、炎性细胞因子和内毒素带来的刺激，会引发大范围血管病变的代谢性疾病等现象均易引起t-PA・PAI-1复合物上升。有报告指出，在并发有多器官功能衰竭的弥散性血管内凝血中，病程中血中t-PA・PAI-1复合物呈高值的病例绝大多数预后不佳。下图是tPAI.C的作用机制。
2. 性能表现
针对tPAI.C的检测，西宝生物推出5种单克隆抗体及1种抗原。具体性能如下（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行更为详细的验证）
2.1化学发光（AE）平台
组合1：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204A）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205A）标记吖啶酯；
线性范围：1 ng/mL-100 ng/mL；最低检出限：1 ng/mL。
组合2：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204A）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204B）标记吖啶酯；
线性范围：1 ng/mL-100 ng/mL；最低检出限：1 ng/mL。
2.2化学发光（AP）平台
组合3：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204C）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205C）标记碱性磷酸酶；
线性范围：1 ng/mL-100 ng/mL；最低检出限：1 ng/mL。
2.3稳定性评估
2.3.1 tPAI.C抗原稳定性
采用磁珠标记物稀释液（货号：DCD0532A）将tPAI.C抗原（货号：EDD0796B）稀释成5个梯度（液体型），进行37℃热稳定性实验。如表1所示，tPAI.C抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±10%以内，表明tPAI.C抗原稀释梯度（液体型）热稳定性良好。
表1 tPAI.C抗原稀释梯度（液体型）热稳定性7天数据
序号 | tPAI.C 抗原稀释浓度浓度ng/mL | tPAI.C 抗原稀释梯度（液体型）2℃-8℃储存7天发光值均值 | tPAI.C 抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天发光值均值 | tPAI.C 抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异 |
S0 | 0 | 17053 | 17591 | 3.2% |
S1 | 1 | 157554 | 149224 | -5.3% |
S2 | 5 | 640325 | 625343 | -2.3% |
S3 | 12.5 | 1536860 | 1473164 | -4.1% |
S4 | 50 | 6238834 | 5723227 | -8.3% |
S5 | 100 | 11871700 | 11114161 | -6.4% |
平均变化（不含S0） | -5.3% | |||
2.3.2 AP体系试剂稳定性
采用磁珠标记物稀释液（货号：DCD0532A）将Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204C）包被羧基磁珠浓缩液稀释成工作液，进行37℃热稳定性实验；采用碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（货号：DCD0533A）将Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205C）标记碱性磷酸酶浓缩液稀释成工作液，进行37℃热稳定性实验。如表2所示：
a.tPAI.C磁珠工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化为-1.6%，在±10%以内（不含S0），表明tPAI.C磁珠工作液热稳定性良好；
b.tPAI.C碱性磷酸酶工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化为-9.1%，在±10%左右（不含S0），表明tPAI.C碱性磷酸酶工作液热稳定性较好。
c.tPAI.C全试剂工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化为-13.6%，在±15%左右（不含S0），表明tPAI.C试剂热稳定性较好。
表2 tPAI.C试剂热稳定性7天数据
序号 | tPAI.C 抗原稀释梯度浓度（ng/mL） | 磁珠工作液37℃热加速7天偏差 | 碱磷酶工作液37℃热加速7天偏差 | 全试剂工作液37℃热加速7天偏差 |
S0 | 0 | -8.2% | -5.9% | -9.4% |
S1 | 1 | -4.4% | -9.7% | -13.1% |
S2 | 5 | -2.5% | -10.9% | -13.4% |
S3 | 12.5 | -0.5% | -8.5% | -14.1% |
S4 | 50 | -0.4% | -9.1% | -14.2% |
S5 | 100 | -0.2% | -7.4% | -13.3% |
平均变化（不含S0） | -1.6% | -9.1% | -13.6% | |
3.临床相关性
3.1化学发光（AE）平台
西宝tPAI.C抗体配对组合1（＜20 ng/mL）的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²>0.92。
西宝tPAI.C抗体配对组合1（＜100 ng/mL）的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²在0.95左右。
西宝tPAI.C抗体配对组合2（＜20 ng/mL）的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²>0.92。
西宝tPAI.C抗体配对组合2（＜100 ng/mL）的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²在0.95左右。
3.2化学发光（AP）平台
西宝tPAI.C抗体配对组合3的发光值与希森美康 tPAI.C发光试剂临床相关性R²在0.95左右。
4. 测试方案
4.1化学发光（AE）平台抗体配对组合1
待测抗原：tPAI.C抗原（货号：EDD0796B）
样本/校准品:加样量10ul；
试剂1：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204A）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205A）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：10ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.2化学发光（AE）平台抗体配对组合2
样本/校准品:加样量50ul；
试剂1：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204A）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；
试剂2：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；
反应条件：
第一步：50ul样本 + 50ul试剂1 + 50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。
4.3化学发光（AP）平台抗体配对组合3
待测抗原：tPAI.C抗原（货号：EDD0796B）
样本/校准品:加样量5ul；
试剂1：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1204C）包被-磁珠稀释物，用量100ul/测试；
试剂2：Anti tPAI.C antibody（货号：EKY1205C）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量100ul/测试；
反应条件：
第一步：5ul样品 + 100ul试剂1，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入100ul试剂2，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，进行测试。
测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。
5.产品信息
产品名称 | 货号 | 推荐配对 |
纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体 | EKY1205A | 组织型纤溶酶原激活物（t-PA）抗体（货号：EKY1204A）包被羧基磁珠+纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体（货号：EKY1205A）标记吖啶酯 （发光两试剂配对组合1） 组织型纤溶酶原激活物（t-PA）抗体（货号：EKY1204A）包被羧基磁珠+纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体（货号：EKY1204B）标记吖啶酯 （发光两试剂配对组合2） |
组织型纤溶酶原激活物（t-PA）抗体 | EKY1204A | |
纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体 | EKY1204B | |
抗纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗体 | EKY1204C | 纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗体（货号：EKY1204C）包被羧基磁珠+纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗体（货号：EKY1204D）标记碱性磷酸酶 （发光两试剂配对组合3） |
抗纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗体 | EKY1205C | |
组织纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物（tPAI.C）抗原 | EDD0796B | |
组织型纤溶酶原激活物（t-PA）抗体（货号：EKY1204A）-羧基磁珠浓缩液 | DKY1328A | |
纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体（货号：EKY1205A）-吖啶酯浓缩液 | DKY1328B | |
纤溶酶原激活物抑制剂-I(PAI)抗体（货号：EKY1204B）-吖啶酯浓缩液 | DKY1328C | |
组织型纤溶酶原激活物抗体（货号：）-羧基磁珠浓缩液 | DKY1328D | |
组织型纤溶酶原激活物抗体（货号：）-碱性磷酸酶浓缩液 | DKY1328E | |
羧基磁性微球，1.2μm | DEG0800D | |
AMPPD 发光底物液（即用型） | DCD0517B | |
重组碱性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠标记物稀释液（化学发光） | DCD0532A | |
碱性磷酸酶（ALP）标记物稀释液（化学发光） | DCD0533A |
