1.项目背景
摘自《人偏肺病毒感染诊疗方案(2023年版)》
人偏肺病毒感染是人体感染人偏肺病毒(humanmetapneumovirus,hMPV)后引起的一种急性呼吸道传染病,全年散发,多发生于冬末及春初。hMPV感染大多表现为轻度自限性疾病,部分患者因出现毛细支气管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重和支气管哮喘急性发作等并发症需要住院治疗,免疫功能低下者可进展为重症肺炎,出现急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或多器官功能不全等,甚至导致死亡。
1.1 病原学
hMPV属于肺炎病毒科,偏肺病毒属,为有包膜的单股负链RNA病毒,平均直径大约200nm。hMPV包括A和B两个基因型,可分为A1、A2、B1、B2四个亚型,这些亚型常常同时流行,各亚型病毒传播力和致病性未见明显差别。
hMPV对热敏感,60℃ 30分钟可灭活;对乙醚、氯仿等有机溶剂敏感;1%次氯酸钠等含氯消毒剂、5%福尔马林、2%戊二醛、1%碘伏等常用消毒剂可灭活病毒;对0.1%脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠(SDS)和曲拉通X-100(TritonX-100)等去污剂敏感。
1.2 临床表现
潜伏期3-9天,多为3-6天。
多表现为上呼吸道感染症状,如发热、咳嗽、鼻塞、流涕、声音嘶哑等,约1周左右症状逐渐缓解。病情严重者可出现毛细支气管炎、重症肺炎和ARDS,COPD患者感染后病情可加重,支气管哮喘患者可诱发急性发作。严重下呼吸道感染多见于幼儿、老年人等人群。肺移植、造血干细胞移植等免疫功能低下人群感染后症状更重,病死率也相对较高。
1.3 实验室及影像学检查
a.病毒核酸检测:采集呼吸道标本(鼻咽拭子、咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液等)采用荧光定量PCR、病毒基因测序等方法检测hMPV核酸。核酸检测的敏感性和特异性高。
b.病毒抗原检测:酶免疫法、胶体金法和免疫荧光法等方法检测呼吸道标本中hMPV抗原,但病毒抗原检测阴性不能除外诊断。
c.病毒培养分离:从呼吸道标本培养分离hMPV。
d.血清学检测:检测血清中特异性IgM抗体和IgG抗体,IgM抗体检测敏感性和特异性较低。
2.测试方案及性能表现
针对人偏肺病毒(hMPV)抗原的检测,西宝生物推出2种单克隆抗体和1种抗原,适合胶体金免疫层析、彩色乳胶免疫层析及荧光免疫层析平台。具体性能如下。
(以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证,建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证)。
2.1 胶体金免疫层析平台
2.1.1 抗体配对组合1:人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记胶体金+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜;
2.1.2 人偏肺病毒(HMPV)M抗原(货号:EDD0812A)用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL。
2.1.3 反应模式:80uL样品直接上样,反应时间15min-20min;
2.1.4 实验结果:在胶体金免疫层析平台,采用此抗体配对组合1测试HMPV M抗原稀释梯度均显色,灵敏度可达0.05ng/mL。该实验结果表明此抗体配对在胶体金层析平台测试性能良好。

胶体金层析平台测试抗原梯度示意图
2.1.5 特异性:分别测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原,结果均为阴性,表明特异性良好。

胶体金层析平台测试特异性示意图
2.2 彩色乳胶免疫层析平台
2.2.1 抗体配对组合2:人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记彩色乳胶+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜;
2.2.2 人偏肺病毒(HMPV)M抗原(货号:EDD0812A)用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.02ng/mL、0.01ng/mL、0.005ng/mL。
2.2.3 反应模式:80uL样品直接上样,反应时间15min-20min;
2.2.4 实验结果:在彩色乳胶免疫层析平台,采用此抗体配对组合2测试HMPV M抗原稀释梯度均显色,灵敏度可达0.01ng/mL。表明此抗体配对在彩色乳胶免疫层析平台测试性能良好。

彩色乳胶层析平台测试抗原示意图
2.2.5 特异性:分别测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原,结果均为阴性,表明特异性良好。

彩色乳胶层析平台测试特异性示意图
2.3 荧光免疫层析平台
2.3.1抗体配对组合3:人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记荧光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜;
2.3.2 人偏肺病毒(HMPV)M抗原(货号:EDD0812A)用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.01ng/mL。
2.3.3 反应模式:80uL样品直接上样,反应时间15min-20min;
2.3.4 实验结果:在荧光免疫层析平台,采用此抗体配对组合3测试HMPV M抗原稀释梯度灵敏度可达0.01ng/mL(如表实验数据所示)。表明此抗体配对在荧光免疫层析平台测试性能良好。此外,测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原,结果均为阴性,表明特异性良好。
表1 hMPV抗体配对组合测试数据
序号
|
HMPV M
浓度(ng/mL)
|
T
|
C
|
T/C
|
区分度
|
1
|
50
|
278348
|
33819
|
8.231
|
355%
|
2
|
10
|
229049
|
98808
|
2.318
|
483%
|
3
|
1
|
90519
|
188470
|
0.480
|
197%
|
4
|
0.5
|
51324
|
210947
|
0.243
|
207%
|
5
|
0.2
|
24432
|
207885
|
0.118
|
190%
|
6
|
0.1
|
13397
|
217067
|
0.062
|
200%
|
7
|
0.05
|
6019
|
195010
|
0.031
|
436%
|
8
|
0.01
|
1504
|
212230
|
0.007
|
|
9
|
0
|
0
|
213275
|
0
|
|
10
|
腺病毒抗原(10ug/mL)
|
470
|
264936
|
0.002
|
|
11
|
合胞病毒抗原(10ug/mL)
|
876
|
259908
|
0.003
|
|
12
|
2019-nCOV-SRFc3cho抗原(10ug/mL)
|
0
|
247336
|
0.000
|
|
13
|
2019-nCOV-SRHcho抗原(10ug/mL)
|
514
|
237353
|
0.002
|
测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。
3.产品信息
产品名称
|
货号
|
推荐配对
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体
|
FKY0936C
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记胶体金+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜(胶体金层析配对组合1)
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记彩色乳胶+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜(彩色乳胶层析配对组合2)
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记荧光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜(荧光免疫层析配对组合3)
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体
|
FKY0936D
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)-胶体金浓缩液
|
DKY1338A
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)-彩色乳胶浓缩液
|
DKY1338B
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)-荧光微球浓缩液
|
DKY1338C
|
|
HMPV Matrix Protein
人偏肺病毒 (hMPV)M蛋白
|
EDD0812A
|
|
胶体金(40nm,1OD)
|
DXJ9917B-100ml
|
|
红色羧基乳胶微球,400nm
|
DEG0809A-10ml
|
|
时间分辨荧光微球,羧基(200nm)
|
AEG0786B
|
|
1.项目背景
摘自《人偏肺病毒感染诊疗方案(2023年版)》
人偏肺病毒感染是人体感染人偏肺病毒(humanmetapneumovirus,hMPV)后引起的一种急性呼吸道传染病,全年散发,多发生于冬末及春初。hMPV感染大多表现为轻度自限性疾病,部分患者因出现毛细支气管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重和支气管哮喘急性发作等并发症需要住院治疗,免疫功能低下者可进展为重症肺炎,出现急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或多器官功能不全等,甚至导致死亡。
1.1 病原学
hMPV属于肺炎病毒科,偏肺病毒属,为有包膜的单股负链RNA病毒,平均直径大约200nm。hMPV包括A和B两个基因型,可分为A1、A2、B1、B2四个亚型,这些亚型常常同时流行,各亚型病毒传播力和致病性未见明显差别。
hMPV对热敏感,60℃ 30分钟可灭活;对乙醚、氯仿等有机溶剂敏感;1%次氯酸钠等含氯消毒剂、5%福尔马林、2%戊二醛、1%碘伏等常用消毒剂可灭活病毒;对0.1%脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠(SDS)和曲拉通X-100(TritonX-100)等去污剂敏感。
1.2 临床表现
潜伏期3-9天,多为3-6天。
多表现为上呼吸道感染症状,如发热、咳嗽、鼻塞、流涕、声音嘶哑等,约1周左右症状逐渐缓解。病情严重者可出现毛细支气管炎、重症肺炎和ARDS,COPD患者感染后病情可加重,支气管哮喘患者可诱发急性发作。严重下呼吸道感染多见于幼儿、老年人等人群。肺移植、造血干细胞移植等免疫功能低下人群感染后症状更重,病死率也相对较高。
1.3 实验室及影像学检查
a.病毒核酸检测:采集呼吸道标本(鼻咽拭子、咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液等)采用荧光定量PCR、病毒基因测序等方法检测hMPV核酸。核酸检测的敏感性和特异性高。
b.病毒抗原检测:酶免疫法、胶体金法和免疫荧光法等方法检测呼吸道标本中hMPV抗原,但病毒抗原检测阴性不能除外诊断。
c.病毒培养分离:从呼吸道标本培养分离hMPV。
d.血清学检测:检测血清中特异性IgM抗体和IgG抗体,IgM抗体检测敏感性和特异性较低。
2.测试方案及性能表现
针对人偏肺病毒(hMPV)抗原的检测,西宝生物推出2种单克隆抗体和1种抗原,适合胶体金免疫层析、彩色乳胶免疫层析及荧光免疫层析平台。具体性能如下。
(以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证,建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证)。
2.1 胶体金免疫层析平台
2.1.1 抗体配对组合1:人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记胶体金+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜;
2.1.2 人偏肺病毒(HMPV)M抗原(货号:EDD0812A)用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL。
2.1.3 反应模式:80uL样品直接上样,反应时间15min-20min;
2.1.4 实验结果:在胶体金免疫层析平台,采用此抗体配对组合1测试HMPV M抗原稀释梯度均显色,灵敏度可达0.05ng/mL。该实验结果表明此抗体配对在胶体金层析平台测试性能良好。

胶体金层析平台测试抗原梯度示意图
2.1.5 特异性:分别测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原,结果均为阴性,表明特异性良好。

胶体金层析平台测试特异性示意图
2.2 彩色乳胶免疫层析平台
2.2.1 抗体配对组合2:人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记彩色乳胶+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜;
2.2.2 人偏肺病毒(HMPV)M抗原(货号:EDD0812A)用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.02ng/mL、0.01ng/mL、0.005ng/mL。
2.2.3 反应模式:80uL样品直接上样,反应时间15min-20min;
2.2.4 实验结果:在彩色乳胶免疫层析平台,采用此抗体配对组合2测试HMPV M抗原稀释梯度均显色,灵敏度可达0.01ng/mL。表明此抗体配对在彩色乳胶免疫层析平台测试性能良好。

彩色乳胶层析平台测试抗原示意图
2.2.5 特异性:分别测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原,结果均为阴性,表明特异性良好。

彩色乳胶层析平台测试特异性示意图
2.3 荧光免疫层析平台
2.3.1抗体配对组合3:人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记荧光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜;
2.3.2 人偏肺病毒(HMPV)M抗原(货号:EDD0812A)用合适的稀释液按照理论浓度依次稀释到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.01ng/mL。
2.3.3 反应模式:80uL样品直接上样,反应时间15min-20min;
2.3.4 实验结果:在荧光免疫层析平台,采用此抗体配对组合3测试HMPV M抗原稀释梯度灵敏度可达0.01ng/mL(如表实验数据所示)。表明此抗体配对在荧光免疫层析平台测试性能良好。此外,测试浓度为10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原,结果均为阴性,表明特异性良好。
表1 hMPV抗体配对组合测试数据
序号
|
HMPV M
浓度(ng/mL)
|
T
|
C
|
T/C
|
区分度
|
1
|
50
|
278348
|
33819
|
8.231
|
355%
|
2
|
10
|
229049
|
98808
|
2.318
|
483%
|
3
|
1
|
90519
|
188470
|
0.480
|
197%
|
4
|
0.5
|
51324
|
210947
|
0.243
|
207%
|
5
|
0.2
|
24432
|
207885
|
0.118
|
190%
|
6
|
0.1
|
13397
|
217067
|
0.062
|
200%
|
7
|
0.05
|
6019
|
195010
|
0.031
|
436%
|
8
|
0.01
|
1504
|
212230
|
0.007
|
|
9
|
0
|
0
|
213275
|
0
|
|
10
|
腺病毒抗原(10ug/mL)
|
470
|
264936
|
0.002
|
|
11
|
合胞病毒抗原(10ug/mL)
|
876
|
259908
|
0.003
|
|
12
|
2019-nCOV-SRFc3cho抗原(10ug/mL)
|
0
|
247336
|
0.000
|
|
13
|
2019-nCOV-SRHcho抗原(10ug/mL)
|
514
|
237353
|
0.002
|
测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。
3.产品信息
产品名称
|
货号
|
推荐配对
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体
|
FKY0936C
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记胶体金+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜(胶体金层析配对组合1)
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记彩色乳胶+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜(彩色乳胶层析配对组合2)
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)标记荧光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936C)划膜(荧光免疫层析配对组合3)
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体
|
FKY0936D
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)-胶体金浓缩液
|
DKY1338A
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)-彩色乳胶浓缩液
|
DKY1338B
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗体(货号:FKY0936D)-荧光微球浓缩液
|
DKY1338C
|
|
HMPV Matrix Protein
人偏肺病毒 (hMPV)M蛋白
|
EDD0812A
|
|
胶体金(40nm,1OD)
|
DXJ9917B-100ml
|
|
红色羧基乳胶微球,400nm
|
DEG0809A-10ml
|
|
时间分辨荧光微球,羧基(200nm)
|
AEG0786B
|
|