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呼吸道合胞病毒(RSV)-免疫层析(胶体金及彩色乳胶)解决方案

发布时间:2023-12-21 点击数:393
1.项目背景
1.1呼吸道合胞病毒(RSV)背景介绍
呼吸道合胞病毒(RSV)会引起肺部和呼吸道感染。这种病毒非常普遍,大多数儿童在 2 岁前就感染过这种病毒。呼吸道合胞体病毒也可感染成人。在成人和老年人以及健康的儿童中,呼吸道合胞病毒 的症状较轻,通常与普通感冒相似。通常只需要采取自我护理措施便可以缓解任何不适。呼吸道合胞病毒 可导致一些人群出现严重感染,包括 12 个月及更小的宝宝(婴儿,特别是早产儿)、老年人、心肺疾病患者或任何免疫系统脆弱(免疫受损)的人群。
1.2什么是RSV
相对于流感、新冠来说,大家对RSV的关注显得微不足道,但对于婴儿和老年人来说,RSV病毒可能是致命的。根据美国疾病控制与预防中心的数据,在美国RSV病毒每年导致5.8万例5岁以下的儿童和17.7万例65岁及以上的老年人住院,其中,1.3万例老年人死亡。 呼吸道合胞病毒(RSV)属于副黏病毒科、肺病毒属的单股、负链RNA病毒。根据基因组序列RSV分为A、B两种亚型,两种亚型的毒株可同时引起传播感染,但一般只有一种亚型的毒株占主导地位。RSV是一种包膜病毒,RSV病毒颗粒直径100-300nm,基因组长约15.2kb,包含10个基因,编码11种蛋白质。其中两个跨膜蛋白G蛋白和F蛋白是病毒的两个主要保护性抗原。

图1 RSVRNA基因组(图源:来自网络)
融合蛋白(Fusion protein, F)被宿主蛋白酶切割成F1和F2两个片段后才具有活性,能引起病毒囊膜与宿主细胞膜融合,在RSV感染引发的免疫病理中起作用,是目前抗体、疫苗及其他治疗性药物研发的热点蛋白。
表面黏附糖蛋白(Attachment glycoprotein, G)主要负责对宿主细胞的附着,使RSV吸附于宿主细胞上导致感染开始。G蛋白在不同菌株间存在差异,保守性不如F蛋白高。核衣壳蛋白(Nucleoprotein, N)包裹病毒基因组,形成核蛋白复合体。
RSV相关蛋白、抗体等试剂在疫苗开发、药物开发以及诊断试剂开发中的应用。
1.3在诊断试剂开发中的应用
RSV是免疫缺陷人群及婴幼儿严重呼吸道疾病的主要致病因子,在世界范围内发病率和死亡率都很高。早期和准确的诊断RSV对合适的治疗至关重要。 RSV抗原检测方法常用的有ELISA和免疫荧光法,而基于切向流技术的RSV抗原检测具有便携、快速、可实现床旁检测等优势。随着检测技术的发展,RSV检测方法的灵敏度和特异性也在不断提高。而抗原、抗体是免疫学检测试剂的主要生物活性组分,直接影响检测结果的特异性和灵敏度。
1.4 RSV传统的检测方法
ELISA法和免疫荧光法是传统的RSV检测方法。一种低成本的改良ELISA方法已经被开发出来,其检测RSV 的F蛋白,可以在25分钟内检测出RSV。免疫荧光法可以使用荧光标记的一抗或二抗快速检测RSV抗原。例如,直接荧光抗体法(direct fluorescent antibody assay, DFA)要求标本中有一定数量的细胞,其灵敏度和特异度分别为94%和96.8%,因其简便、快速而被临床实验室广泛用于RSV的检测。
另一种快速RSV检测方法是:基于免疫层析技术的侧流免疫分析法(Lateral flow immunoassay,LFIA,使用的是鼻腔洗液或分泌物样本。目前市场上有许多LFIA试剂盒,如BD Directigen EZ RSV、Binax now RSV、RSV Respi-Strip、Remel Xpect、QuickLab RSV test等。
还有一种就是RCR检测方法:PCR方法以巢式RT-PCR技术为基础,利用RSV-A或-B的F基因设计外引物和内引物。该方法已在成人感染的诊断中得到应用。它可以用于检测低病毒滴度的样品,并敏感地鉴定使用基于抗原的检测方法。
西宝生物开发的高质量RSV N重组蛋白和RSV F重组蛋白,可应用于RSV抗原检测试剂核心原料(抗体对)的制备和筛选,也可做为抗原检测试剂的质控品。西宝生物研发团队还筛选出优质的配对抗体为RSV抗原检测试剂盒开发者保驾护航。
2.测试方案及性能表现
2.1胶体金免疫层析平台:
2.1.1抗体配对组合:呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)标记胶体金(喷在释放垫上)+呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)划膜;
2.1.2 呼吸道(RSV)合胞病毒抗原(货号:EKY0217B)用合适的稀释液依次稀释到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL。
2.1.3反应模式:10uL样品+90uL稀释液混匀,取80uL混合液上样,反应时间15min-20min;
2.1.4 实验结果:在胶体金免疫层析平台,采用此抗体配对组合测试呼吸道(RSV)合胞病毒抗原稀释梯度均显色,测试三例阴性样品均不显色,灵敏度可达5ng/mL,表明此抗体配对在胶体金层析平台测试性能良好。

胶体金层析平台测试示意图
2.2彩色乳胶免疫层析平台:
2.2.1抗体配对组合:呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)标记彩色乳胶(喷在释放垫上)+呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)划膜划膜;
2.2.2 呼吸道(RSV)合胞病毒抗原(货号:EKY0217B)用合适的稀释液依次稀释到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、1ng/mL、0.2ng/mL。
2.2.3反应模式:10uL样品+90uL稀释液混匀,取80uL混合液上样,反应时间15min-20min;
2.2.4 实验结果:在彩色乳胶免疫层析平台,采用此抗体配对组合测试呼吸道(RSV)合胞病毒抗原稀释梯度均显色,测试三例阴性样品均不显色,灵敏度可达0.2ng/mL,表明此抗体配对在彩色乳胶免疫层析平台测试性能良好。

彩色乳胶层析平台测试示意图
3.产品信息
产品名称
货号
推荐配对
人呼吸道合胞病毒(RSV)抗体
EKY0828A
呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)标记胶体金+呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)划膜(胶体金层析配对组合)
呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)标记彩色乳胶+呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)划膜(彩色乳胶层析配对组合)
人呼吸道合胞病毒(RSV)抗体
EKY0828B
 
呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)-胶体金浓缩液
DKY1325A
 
呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)-彩色乳胶浓缩液
DKY1325B
 
胶体金(40nm,1OD)
DXJ9917B-100ml
 
红色羧基乳胶微球,400nm
DEG0809A-10ml
 
呼吸道(RSV)合胞病毒抗原
EKY0217B
1.项目背景
1.1呼吸道合胞病毒(RSV)背景介绍
呼吸道合胞病毒(RSV)会引起肺部和呼吸道感染。这种病毒非常普遍,大多数儿童在 2 岁前就感染过这种病毒。呼吸道合胞体病毒也可感染成人。在成人和老年人以及健康的儿童中,呼吸道合胞病毒 的症状较轻,通常与普通感冒相似。通常只需要采取自我护理措施便可以缓解任何不适。呼吸道合胞病毒 可导致一些人群出现严重感染,包括 12 个月及更小的宝宝(婴儿,特别是早产儿)、老年人、心肺疾病患者或任何免疫系统脆弱(免疫受损)的人群。
1.2什么是RSV
相对于流感、新冠来说,大家对RSV的关注显得微不足道,但对于婴儿和老年人来说,RSV病毒可能是致命的。根据美国疾病控制与预防中心的数据,在美国RSV病毒每年导致5.8万例5岁以下的儿童和17.7万例65岁及以上的老年人住院,其中,1.3万例老年人死亡。呼吸道合胞病毒(RSV)属于副黏病毒科、肺病毒属的单股、负链RNA病毒。根据基因组序列RSV分为A、B两种亚型,两种亚型的毒株可同时引起传播感染,但一般只有一种亚型的毒株占主导地位。RSV是一种包膜病毒,RSV病毒颗粒直径100-300nm,基因组长约15.2kb,包含10个基因,编码11种蛋白质。其中两个跨膜蛋白G蛋白和F蛋白是病毒的两个主要保护性抗原。

图1 RSVRNA基因组(图源:来自网络)
融合蛋白(Fusion protein, F)被宿主蛋白酶切割成F1和F2两个片段后才具有活性,能引起病毒囊膜与宿主细胞膜融合,在RSV感染引发的免疫病理中起作用,是目前抗体、疫苗及其他治疗性药物研发的热点蛋白。
表面黏附糖蛋白(Attachment glycoprotein, G)主要负责对宿主细胞的附着,使RSV吸附于宿主细胞上导致感染开始。G蛋白在不同菌株间存在差异,保守性不如F蛋白高。核衣壳蛋白(Nucleoprotein, N)包裹病毒基因组,形成核蛋白复合体。
RSV相关蛋白、抗体等试剂在疫苗开发、药物开发以及诊断试剂开发中的应用。
1.3在诊断试剂开发中的应用
RSV是免疫缺陷人群及婴幼儿严重呼吸道疾病的主要致病因子,在世界范围内发病率和死亡率都很高。早期和准确的诊断RSV对合适的治疗至关重要。 RSV抗原检测方法常用的有ELISA和免疫荧光法,而基于切向流技术的RSV抗原检测具有便携、快速、可实现床旁检测等优势。随着检测技术的发展,RSV检测方法的灵敏度和特异性也在不断提高。而抗原、抗体是免疫学检测试剂的主要生物活性组分,直接影响检测结果的特异性和灵敏度。
1.4 RSV传统的检测方法
ELISA法和免疫荧光法是传统的RSV检测方法。一种低成本的改良ELISA方法已经被开发出来,其检测RSV 的F蛋白,可以在25分钟内检测出RSV。免疫荧光法可以使用荧光标记的一抗或二抗快速检测RSV抗原。例如,直接荧光抗体法(direct fluorescent antibody assay, DFA)要求标本中有一定数量的细胞,其灵敏度和特异度分别为94%和96.8%,因其简便、快速而被临床实验室广泛用于RSV的检测。
另一种快速RSV检测方法是:基于免疫层析技术的侧流免疫分析法(Lateral flow immunoassay,LFIA,使用的是鼻腔洗液或分泌物样本。目前市场上有许多LFIA试剂盒,如BD Directigen EZ RSV、Binax now RSV、RSV Respi-Strip、Remel Xpect、QuickLab RSV test等。
还有一种就是RCR检测方法:PCR方法以巢式RT-PCR技术为基础,利用RSV-A或-B的F基因设计外引物和内引物。该方法已在成人感染的诊断中得到应用。它可以用于检测低病毒滴度的样品,并敏感地鉴定使用基于抗原的检测方法。
西宝生物开发的高质量RSV N重组蛋白和RSV F重组蛋白,可应用于RSV抗原检测试剂核心原料(抗体对)的制备和筛选,也可做为抗原检测试剂的质控品。西宝生物研发团队还筛选出优质的配对抗体为RSV抗原检测试剂盒开发者保驾护航。
2.测试方案及性能表现
2.1胶体金免疫层析平台:
2.1.1抗体配对组合:呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)标记胶体金(喷在释放垫上)+呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)划膜;
2.1.2 呼吸道(RSV)合胞病毒抗原(货号:EKY0217B)用合适的稀释液依次稀释到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL。
2.1.3反应模式:10uL样品+90uL稀释液混匀,取80uL混合液上样,反应时间15min-20min;
2.1.4 实验结果:在胶体金免疫层析平台,采用此抗体配对组合测试呼吸道(RSV)合胞病毒抗原稀释梯度均显色,测试三例阴性样品均不显色,灵敏度可达5ng/mL,表明此抗体配对在胶体金层析平台测试性能良好。

胶体金层析平台测试示意图
2.2彩色乳胶免疫层析平台:
2.2.1抗体配对组合:呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)标记彩色乳胶(喷在释放垫上)+呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)划膜划膜;
2.2.2 呼吸道(RSV)合胞病毒抗原(货号:EKY0217B)用合适的稀释液依次稀释到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、1ng/mL、0.2ng/mL。
2.2.3反应模式:10uL样品+90uL稀释液混匀,取80uL混合液上样,反应时间15min-20min;
2.2.4 实验结果:在彩色乳胶免疫层析平台,采用此抗体配对组合测试呼吸道(RSV)合胞病毒抗原稀释梯度均显色,测试三例阴性样品均不显色,灵敏度可达0.2ng/mL,表明此抗体配对在彩色乳胶免疫层析平台测试性能良好。

彩色乳胶层析平台测试示意图
3.产品信息
产品名称
货号
推荐配对
人呼吸道合胞病毒(RSV)抗体
EKY0828A
呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)标记胶体金+呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)划膜(胶体金层析配对组合)
呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)标记彩色乳胶+呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)划膜(彩色乳胶层析配对组合)
人呼吸道合胞病毒(RSV)抗体
EKY0828B
 
呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828A)-胶体金浓缩液
DKY1325A
 
呼吸道合胞病毒(RSV)抗体(货号:EKY0828B)-彩色乳胶浓缩液
DKY1325B
 
胶体金(40nm,1OD)
DXJ9917B-100ml
 
红色羧基乳胶微球,400nm
DEG0809A-10ml
 
呼吸道(RSV)合胞病毒抗原
EKY0217B

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